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ADN polimerasa
Sólo pueden utilizarse polimerasas que sean capaces de actuar a las elevadas temperaturas empleadas en la reacción. En la actualidad la mayoría de las polimerasas que se suministran comercialmente son versiones recombinantes e incluso mejoradas por ingeniería genética.
Dos enzimas de uso muy extendido son la ADN polimerasa Taq proveniente de la bacteria térmica Thermus aquaticus (se encuentra en manantiales de agua caliente) y la Vent de la bacteria Thermococcus litoralis.
Sus temperaturas óptimas de catálisis oscilan al rededor de los 72ºC, temperatura a la cual incorporan aproximadamente 100 nucleótidos por segundo, siendo estables a temperaturas incluso por encima de 92ºC.
De estas dos la popularidad alcanzada por la Taq rebasa por muchos y diferentes aspectos a otras polimerasas. Esta enzima es una proteína que consta de una sola cadena polipeptídica con un peso molecular de aproximadamente 95 KDa, cuenta con actividad de exonucleasa 5´ 3´. Y su fidelidad correcta de replicación depende de la concentración del ion Mg y de los dNTPs, así como de que haya o no disbalance en la concentración de éstos últimos.
Existen otras enzimas que se usan también aparte de la Taq y la Vent, en donde se requiere actividad correctora de pruebas, proporcionando mayor fidelidad de copiado, como la Pfu o UlTma, o bien que tienen también en determinadas condiciones actividad reverso transcriptasa que les permite catalizar tanto una transcripción reversa (conversión de RNA a DNA), como la propia RCP, como en el caso de la rTth.
Técnica
Para que la técnica funcione se necesita, abundanet suministro de de bases de nucleótidos y dos cebadores, que son secuencias cortas de unos veinte nucleótidos y que se usan para iniciar la reacción (PCR).En primer lugar, se calienta la mezcla para separar las hebras de ADN (el ADN se derrite) y acontinuación se enfría la solución, lo que permite que los cebadores se peguen a las partes adecuadas de la hebra de ADN (se empujan unas a otras hasta que encuentan el complemento exacto, y entonces se ensamblan, actuando como límites de la región de la molécula que va a ser duplicada). Para terminar, se aumenta la temperatura hasta el valor en que puede actuar la polimerasa, y sobre la plantilla crece una hebra nueva complementaria
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